基因过表达
工具载体介绍
表达系统 | 真核表达载体 | 慢病毒载体 | 重组腺相关病毒载体 | 重组腺病毒载体 |
---|---|---|---|---|
载体基因特性 | 双链DNA质粒 | RNA逆转录病毒 | 单链DNA病毒 | 双链DNA病毒 |
外源基因表达时间 | 24h开始表达,持续3-7天 | 2-4天开始表达,长时间稳定表达 | 7-14天开始表达 | 1-2天开始表达 |
插入片段大小 | 8kb左右 | 4kb左右 | 2.8kb左右 | 4kb左右 |
稳定细胞株筛选 | 难操作 | 可以 | 不可以 | 不可以,瞬时表达 |
细胞实验 | 细胞系,部分转染效率低 | 首选,广谱,感染效率高 | 细胞系,部分血清型转染效率低 | 广谱,感染效率高 |
动物实验 | 不适合 | 适合,根据观察时间和注射部位 | 首选,根据观察时间和注射部位 | 免疫原性高,慎选 |
滴度范围 | 无 | 10 8 ~10 9 TU/ml | 10 12 -10 13 VG/ml | 10 10 -10 11 PFU/ml |
载体图谱中常见元件介绍
元件名称 | 类型 | 用途 |
---|---|---|
启动子 | CMV、CAG、EF1a、U6等 | 广谱或特异启动目的基因的表达 |
hSyn、CaMKIIα等 | 特异性启动子,在特定的组织细胞中启动目的基因的表达 | |
蛋白标签 | 3xFLAG、HA 、6xHis、Myc等 | 与目的基因融合表达,常用于检测外源蛋白表达水平 |
荧光标记 | EGFP、mCherry、mNeonGreen等 | 可与目的基因融合或非融合表达用于检测转染、感染效果 |
抗性基因 | Puro、Neo、Hygro、BSD等 | 真核抗性,常用于稳定株筛选 |
Amp、Kan | 原核抗性,常用于原核细菌培养,质粒扩增 | |
连接元件 | Linker | 用于连接两个基因,融合表达时常用,可降低因融合表达对蛋白折叠和功能的影响 |
IRES、2A | 用于连接两个基因,达到非融合表达的效果 | |
其它元件 | WPRE | 增加目的基因的表达 |
载体选择(部分)
载体类别 | 编号 | 载体元件 |
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慢病毒过表达 | GL127 | pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE |
GL121 | pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE | |
GL107 | pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE | |
GL122 | pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE | |
GL124 | pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE | |
腺病毒过表达 | H225 | pADV-mCMV-MCS-3xFLAG |
H201 | pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG | |
H213 | pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP | |
H204 | pADV-mCMV-mCherry-HA | |
腺相关病毒过表达 | AOV024 | pAAV-CMV-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE |
AOV025 | pAAV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE | |
AOV064 | pAAV-hSyn-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE | |
AOV065 | AAV-hSyn-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE | |
H9429 | pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA | |
H9525 | pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA | |
H10881 | pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA | |
H10886 | pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA |
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